技術(shù)文獻(xiàn)
技術(shù)文獻(xiàn)
用途:熒光標(biāo)記細(xì)胞系廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和藥物開發(fā)等多個(gè)領(lǐng)域,常見用途見圖。
該技術(shù)的核心原理基于分子生物學(xué)的基因重組技術(shù)。通過(guò)構(gòu)建含有熒光蛋白基因的質(zhì)粒載體,借助病毒轉(zhuǎn)染或電穿孔等方法將其整合至宿主細(xì)胞基因組。當(dāng)細(xì)胞表達(dá)外源基因時(shí),核糖體會(huì)翻譯產(chǎn)生具有自發(fā)熒光特性的蛋白,這些熒光分子在特定波長(zhǎng)激發(fā)光照射下發(fā)出可見熒光。最新發(fā)展的雙熒光標(biāo)記系統(tǒng)(如GFP-RFP串聯(lián)標(biāo)簽)甚至能同時(shí)追蹤兩種細(xì)胞亞群互作。
值得注意的是,熒光標(biāo)記技術(shù)正與CRISPR基因編輯深度融合。研究者通過(guò)同源重組將熒光報(bào)告基因精準(zhǔn)插入特定基因位點(diǎn),當(dāng)靶基因激活時(shí)即觸發(fā)熒光表達(dá)。這種"基因開關(guān)"式設(shè)計(jì)已應(yīng)用于干細(xì)胞分化示蹤,成功繪制出神經(jīng)前體細(xì)胞分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞的動(dòng)態(tài)圖譜。隨著超分辨率顯微技術(shù)的進(jìn)步,熒光標(biāo)記細(xì)胞系正在單分子水平揭示更多生命活動(dòng)的奧秘。