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技術(shù)文獻

血液RNA提取的方法有哪兩類及它們的注意事項

文字:[大][中][小] 2019-6-25    瀏覽次數(shù):492    
血液RNA提取的方法可以細分為需要預先處理和不需要預先處理兩類。
       眾所周知,人和其他哺乳動物血液只有白細胞(不到總數(shù)的 5%)等少量細胞含有RNA,需要預先處理的血液 RNA 提取法其實就是分離白細胞再提取RNA, 本質(zhì)上是白細胞RNA提取。分離白細胞的方法有 Ficoll-Hypaque 密度離心法(白細胞在 Buffy Coat 中)和紅細胞裂解法。由于預處理操作會劇烈改變血液RNA含量(British J. Haematol., 126:231, 2004),所以無預處理 提取法將是未來提取血液RNA的發(fā)展方向。
白細胞RNA提取和全血RNA提取都需注意以下問題:
一、血液越新鮮越 好,因血液細胞內(nèi)外都有大量 RNase,容易使RNA降解。血液在 4℃的放置 時間最好不要超過四天;
二、盡可能抑制或滅活血液特有的RNase(如 EDN, ECP),因為它們不但跟 RNase A 一樣非常穩(wěn)定,而且不被 RNase Inhibitor 和 RVC 抑制,還能抑制逆轉(zhuǎn)錄酶的活性,它們殘留在RNA樣品中不但會降解RNA,還會干擾后續(xù)的RT-PCR反應;
三,血液富含糖蛋白,粘蛋白和血紅蛋白,提取需要去除糖蛋白污染;
四,由于RNA量少,提取時很容易丟失, 可以適當使用核酸沉淀助沉劑;
五,血液細胞量隨生理病理因素變化波動性大, 注意調(diào)整血液和提取試劑的最佳用量。 最簡單的方法是使用已經(jīng)經(jīng)過廠家優(yōu)化的產(chǎn)品,比如用于白細胞RNA提取的 TRIzol、QIAamp RNA Blood Mini Kit 和xuanya的動物 RNAOUT;用于全血RNA 提取的 TRIzol LS,PAXgene Blood RNA Kit 和xuanya的全血RNAOUT和柱式血液RNAOUT。
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